Y-РНК — это группа некодирующих РНК, участвующих в регуляции транскрипции и репликации. Известно, что Y-РНК могут выходить во внеклеточную среду в составе везикул. Вероятно, эти молекулы передают сигнал, перемещаясь с помощью везикул от одних клеток к другим. Основной жидкостью человека, осуществляющей связь между органами, является кровь. При этом показано, что существенная часть везикул, в этой жидкости, имеют эритроцитарное происхождение. Ранее в нашей научной группе было показано, что концентрации некоторых коротких некодирующих РНК в эритроците и везикуле эритроцитарного происхождения практически не отличаются. Однако уровень Y-РНК в этих структурах ранее не сравнивался. Целью нашей работы было сравнение относительных концентрации двух Y-РНК (hY4 и hY5) в эритроцитах, и в везикулах, выделенных этими клетками. Поскольку эритроцит, не имеющий ядра и митохондрий, не является полноценной клеткой в работе для контроля. также сравнились уровни этих молекул в нормальных клетках крови — моноцитах.
Кровь, полученная от шести доноров (1 женщина и 5 мужчин 25-50 лет), разделялась на клетки и обедненную тромбоцитами плазму. Клетки и плазма с везикулами были окрашены антителами против белка CD235-РЕ — главного белка мембраны эритроцитов. Для получения моноцитов эритроциты лизировали реагентом VersaLyse. После лизиса клетки окрашивали антителами CD45-APC, CD16-PC7, CD14-PC5.5. На приборе MoFlo Astrios EQ было отсортировано по 3000 событий (везикул или клеток (моноцитов и эритроцитов)) в каждой пробе. Из проб выделялась РНК, ревертировалась со случайными праймерами и проводилась полимеразная цепная реакция в реальном времени со специфическими праймерами против hY4 и hY5. Относительная концентрация Y-РНК определялась по формуле 2(Ct(негативного контроля) - Ct(рабочей пробы)). При сравнении уровней hY4 и hY5 в эритроцитах и везикулах не обнаружено достоверных отличий между фракциями (p>0.9), в то время как уровень hY4 в моноцитах в 4 раза больше чем в эритроцитах (p=0,0119). При этом количество hY5 в 46 раз выше в 13 моноцитах чем в эритроцитах (p=0,0049). Вероятно, в везикулах эритроцитарного происхождения Y-РНК достаточно плотно упакована, поскольку концентрация в везикуле сопоставима с концентрацией той же РНК в самом эритроците, размер которого намного больше везикулы. Причины этого вероятно в том, что эритроцитарные везикулы являются важным транспортным резервуаром для молекул Y-РНК. Работа выполнена при поддержке РНФ (№25-25-00057).
