Введение. У бесхвостых амфибий в сетчатке в небольшом количестве имеются уникальные «зеленые» палочки, обладающие более коротковолновым спектром поглощения по сравнению с классическими «красными» палочками. Их функция не до конца понятна, есть предположение, что они могут обеспечивать зрение при сверхнизких уровнях освещенности. Номенклатура белков каскада фототрансдукции, универсальна для фоторецепторов позвоночных, но отдельные белки могут иметь разные изоформы, что может объяснять различия в работе
«зеленых» и «красных» палочек.
Цель исследования. Разработать и апробировать методику для селективного отбора гомогенной фракции палочек сетчатки лягушки P. ridibundus и жабы B. bufo для анализа изоформ белков каскада фототрансдукции с помощью метода
single-cell RT-PCR.
Материалы и методы. Для определения спектрального типа палочки была
использована техника регистрации тока одиночной палочки при помощи
всасывающей пипетки (suction pipette) [1]. Далее палочка изолируется и
криофиксируется в жидком азоте. Накопленный материал анализируются
методом SC RT-PCR.
Результаты. Протокол был оптимизирован для максимально быстрого и однозначного определения спектрального типа. Вся процедура спектральной идентификации занимала около 5 минут. Эмпирически полученное соотношение красных/зеленых палочек было равно 10:1. Мы показали, что 5 наружных сегментов достаточно для идентификации белков методом SC-PCR.
Заключение. С использованием новой методики нам удалось набрать для
каждого отдельного эксперимента необходимое количество наружных сегментов «зеленых» и «красных» палочек. В работе представлены данные о распределении изоформ, а также сделаны выводы о их возможном влиянии на функциональные свойства палочек.

Источник финансирования. Работа поддержана грантом РНФ №24-24-00484.