TY - JOUR

T1 - ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПОВЫШЕННОЙ ЭКСПРЕССИИ RUNX2 НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ ОСТЕОБЛАСТОВ ЧЕЛОВЕКА

AU - Громова, Екатерина Сергеевна

AU - Малашичева, Анна Борисовна

AU - Костина, Дарья Алексеевна

AU - Лобов, Арсений

AU - Карелкин, В. В.

N1 - ISSN 2313-1829

PY - 2022/11/23

Y1 - 2022/11/23

N2 - Runx2 является ключевым регулятором и маркером остеогенной дифференцировки. Он влияет на экспрессию других проостеогенных генов и является звеном многих сигнальных каскадов, таких как Wnt, Notch, Sox9, Msx2, и сигнальный путь Hedgehog [1]. Регуляторная активность Runx2 по-разному изменяется в отношении разных генов-мишеней в зависимости от стадии дифференцировки, а на стадии минерализации его уровень снижается. Runx2 является важнейшим регулятором дифференцировки остеобластов. Остеобласты – это клетки взрослой кости, которые синтезируют большое количество различных белков, в том числе Runx2, и обладают способностью к внеклеточной минерализации. Однако роль Runx2 на поздних стадиях остеогенной дифференцировки остается слабо изученной.Чтобы выяснить, какую роль играет Runx2 в дифференцировке остеобластов, были созданы лентивирусные конструкции, несущие 3 различные изоформы гена RUNX2: ген, кодирующий полноразмерный белок дикого типа, кодирующий укороченный вариант белка дикого типа и мутантный вариант гена RUNX2, содержащий стоп-кодон, а так же лентивирусная конструкция, несущая шпилечную РНК к RUNX2, приводящую к подавлению синтеза белка Runx2 при внесении в клетки. Методом лентивирусной трансдукции мы активировали либо подавляли продукцию Runx2 в первичных клетках остеобластов человека.Биологический эффект лентивирусных конструкций был подтвержден несколькими методами: методом ПЦР в реальном времени было показано, что внесение лентивирусных конструкций приводило к повышению транскрипции RUNX2 для всех трех изоформ в различных типах клеток. Методом иммуноблоттинга было показано, что при использовании созданных лентивирусных конструкций в клетках синтезируется повышенное количество соответствующих изоформ белка Runx2. С помощью исследования активности промотора RUNX2 методом измерения активности люциферазы было показано, что промотор RUNX2 активируется в ответ на внесение конструкций. При внесении шпильки на RUNX2 активность его промотра снижалась.Влияние повышенной экспрессии RUNX2 на фенотип остеобластов было исследовано методами ПЦР в реальном времени и иммуноцитохимии. Согласно полученным результатам, RUNX2 стимулирует экспрессию остеокальцина, классической мишени RUNX2 и подавляет экспрессии остеомаркера BMP2 в остеобластах, а внесение шпильки на RUNX2 нивелирует этот эффект. Таким образом, было показано, что активация Runx2 в остеобластах влияет на их синтетические способности.

AB - Runx2 является ключевым регулятором и маркером остеогенной дифференцировки. Он влияет на экспрессию других проостеогенных генов и является звеном многих сигнальных каскадов, таких как Wnt, Notch, Sox9, Msx2, и сигнальный путь Hedgehog [1]. Регуляторная активность Runx2 по-разному изменяется в отношении разных генов-мишеней в зависимости от стадии дифференцировки, а на стадии минерализации его уровень снижается. Runx2 является важнейшим регулятором дифференцировки остеобластов. Остеобласты – это клетки взрослой кости, которые синтезируют большое количество различных белков, в том числе Runx2, и обладают способностью к внеклеточной минерализации. Однако роль Runx2 на поздних стадиях остеогенной дифференцировки остается слабо изученной.Чтобы выяснить, какую роль играет Runx2 в дифференцировке остеобластов, были созданы лентивирусные конструкции, несущие 3 различные изоформы гена RUNX2: ген, кодирующий полноразмерный белок дикого типа, кодирующий укороченный вариант белка дикого типа и мутантный вариант гена RUNX2, содержащий стоп-кодон, а так же лентивирусная конструкция, несущая шпилечную РНК к RUNX2, приводящую к подавлению синтеза белка Runx2 при внесении в клетки. Методом лентивирусной трансдукции мы активировали либо подавляли продукцию Runx2 в первичных клетках остеобластов человека.Биологический эффект лентивирусных конструкций был подтвержден несколькими методами: методом ПЦР в реальном времени было показано, что внесение лентивирусных конструкций приводило к повышению транскрипции RUNX2 для всех трех изоформ в различных типах клеток. Методом иммуноблоттинга было показано, что при использовании созданных лентивирусных конструкций в клетках синтезируется повышенное количество соответствующих изоформ белка Runx2. С помощью исследования активности промотора RUNX2 методом измерения активности люциферазы было показано, что промотор RUNX2 активируется в ответ на внесение конструкций. При внесении шпильки на RUNX2 активность его промотра снижалась.Влияние повышенной экспрессии RUNX2 на фенотип остеобластов было исследовано методами ПЦР в реальном времени и иммуноцитохимии. Согласно полученным результатам, RUNX2 стимулирует экспрессию остеокальцина, классической мишени RUNX2 и подавляет экспрессии остеомаркера BMP2 в остеобластах, а внесение шпильки на RUNX2 нивелирует этот эффект. Таким образом, было показано, что активация Runx2 в остеобластах влияет на их синтетические способности.

KW - Runx2

KW - остеобласты

KW - остеогенная дифференцировка

UR - https://pure.spbu.ru/admin/files/108629200/2022.Vol.XVII.no.3_Genes_and_cells.pdf

M3 - тезисы

VL - XVII

SP - 120

JO - Гены и клетки

JF - Гены и клетки

SN - 2313-1829

IS - 3

T2 - V Национальный конгресс по регенеративной медицине

Y2 - 23 November 2022 through 25 November 2022

ER -