TY - CHAP

T1 - Изучение жизнеспособности дрожжей у мутантов по генам SUP45 и SUP35

AU - Землянко, Ольга Михайловна

AU - Журавлева, Галина Анатольевна

AU - Ефремова, Елена Павловна

AU - Кадысева, Ангелина Алексеевна

PY - 2024/6

Y1 - 2024/6

N2 - Терминацию трансляции у эукариот обеспечивают белковые факторы eRF1 и eRF3. У дрожжей Saccharomyces cerevisiae их кодируют жизненно важные гены SUP45 и SUP35, соответственно. Мутации в этих генах помимо нарушения точности терминации трансляции вызывают целый ряд фенотипических проявлений, среди которых и снижение жизнеспособности дрожжевых клеток. Тем не менее, ранее в нашей лаборатории были получены и охарактеризованы коллекции нонсенс мутантов по генам SUP45 и SUP35. Для оценки их жизнеспособности использовали традиционные методы: подсчет коэффициента колоний образующих единиц или микроскопический анализ соотношения живых и мертвых клеток с помощью специальных красителей(метиленовый синий и флоксин В). Оба эти подхода трудо- и времязатратны, что повлекло (привело, вызвало) применение современного метода проточной цитометрии к решению данной задачи. Этот метод позволяет в короткий срок обрабатывать большие клеточные выборки и исключает возможные субъективные ошибки. Мы сравнили различные методы оценки жизнеспособности штаммов дикого типа и нонсенс-мутантов по генам SUP45 и SUP35, а также провели количественную оценку жизнеспособности у этих штаммов. Ранее было показано, что у нонсенс-мутантов sup45 или sup35 снижается количество функциональных полноразмерных белков Sup45 или Sup35. Было обнаружено, что в клетках, у которых факторы терминации кодировали только мутантные аллели, представленные на плазмиде, происходит увеличение копийности этих плазмид. Было высказано предположение, что увеличение копийности является компенсаторным механизмом поддержания жизнеспособности нонсенс мутантов. Для подтверждения (проверки) этой гипотезы мы провели оценку жизнеспособности у мутантов sup35 и sup45 при повышенной экспрессии мутантных аллелей.

AB - Терминацию трансляции у эукариот обеспечивают белковые факторы eRF1 и eRF3. У дрожжей Saccharomyces cerevisiae их кодируют жизненно важные гены SUP45 и SUP35, соответственно. Мутации в этих генах помимо нарушения точности терминации трансляции вызывают целый ряд фенотипических проявлений, среди которых и снижение жизнеспособности дрожжевых клеток. Тем не менее, ранее в нашей лаборатории были получены и охарактеризованы коллекции нонсенс мутантов по генам SUP45 и SUP35. Для оценки их жизнеспособности использовали традиционные методы: подсчет коэффициента колоний образующих единиц или микроскопический анализ соотношения живых и мертвых клеток с помощью специальных красителей(метиленовый синий и флоксин В). Оба эти подхода трудо- и времязатратны, что повлекло (привело, вызвало) применение современного метода проточной цитометрии к решению данной задачи. Этот метод позволяет в короткий срок обрабатывать большие клеточные выборки и исключает возможные субъективные ошибки. Мы сравнили различные методы оценки жизнеспособности штаммов дикого типа и нонсенс-мутантов по генам SUP45 и SUP35, а также провели количественную оценку жизнеспособности у этих штаммов. Ранее было показано, что у нонсенс-мутантов sup45 или sup35 снижается количество функциональных полноразмерных белков Sup45 или Sup35. Было обнаружено, что в клетках, у которых факторы терминации кодировали только мутантные аллели, представленные на плазмиде, происходит увеличение копийности этих плазмид. Было высказано предположение, что увеличение копийности является компенсаторным механизмом поддержания жизнеспособности нонсенс мутантов. Для подтверждения (проверки) этой гипотезы мы провели оценку жизнеспособности у мутантов sup35 и sup45 при повышенной экспрессии мутантных аллелей.

M3 - тезисы в сборнике материалов конференции

SP - 383

BT - VIII Съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, посвященный 300‐летию российской науки и высшей школы

PB - Петрополис

ER -