TY - JOUR

T1 - ВЛИЯНИЕ СТИМУЛЯЦИИ И ПОДАВЛЕНИЯ БИОСИНТЕЗА NAD+ НА ПОДДЕРЖАНИЕ ПЛЮРИПОТЕНТНОСТИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК МЫШИ

AU - Антипова, Мария Вячеславовна

AU - Куликова, В.А.

AU - Соловьева,, Л.В.

AU - Кропотов, А.В.

AU - Светлова, М.П.

AU - Якимов, А. П.

AU - Нериновский, Кирилл Борисович

AU - Бахмет, Е. И.

AU - Никифоров, А.А.

PY - 2023

Y1 - 2023

N2 - Никотинамидадениндинуклеотид (NAD+) играет ключевую роль в клеточном метаболизме и сигналинге. В последние годы появилось множество свидетельств того, что NAD+-зависимые процессы принимают участие в регуляции плюрипотентности и дифференцировки эмбриональных стволовых клеток млекопитающих. Основным способом поддержания уровня NAD+ в клетках млекопитающих является его биосинтез из различных форм витамина В3. В настоящей работе мы выяснили, как стимуляция и подавление биосинтеза NAD+ влияют на поддержание плюрипотентности эмбриональных стволовых клеток мыши линии Е14 Tg2a (клетки Е14). Статус плюрипотентности клеток Е14 оценивали при помощи иммуноцитохимического анализа и иммуноблоттинга с использованием антител к фактору плюрипотентности Oct4, а также окраски на щелочную фосфатазу. С помощью метода ЯМР-спектроскопии мы установили, что концентрация NAD+ в плюрипотентных клетках Е14, культивируемых в присутствии фактора ЛИФ, составляет около 4 нмоль/мг и остается неизменной после индукции дифференцировки ретиноевой кислотой. Также мы показали, что фармакологическая стимуляция биосинтеза NAD+ никотинамидрибозидом повышает уровень внутриклеточного NAD+ на 20%, и это не влияет на поддержание плюрипотентности клеток Е14. Более того, в условиях критического истощения внутриклеточного пула NAD+ при подавлении его синтеза из никотинамида ингибитором Nampt (FK866) клетки Е14 сохраняли плюрипотентность, в то время как уровень белка Oct4 был понижен.

AB - Никотинамидадениндинуклеотид (NAD+) играет ключевую роль в клеточном метаболизме и сигналинге. В последние годы появилось множество свидетельств того, что NAD+-зависимые процессы принимают участие в регуляции плюрипотентности и дифференцировки эмбриональных стволовых клеток млекопитающих. Основным способом поддержания уровня NAD+ в клетках млекопитающих является его биосинтез из различных форм витамина В3. В настоящей работе мы выяснили, как стимуляция и подавление биосинтеза NAD+ влияют на поддержание плюрипотентности эмбриональных стволовых клеток мыши линии Е14 Tg2a (клетки Е14). Статус плюрипотентности клеток Е14 оценивали при помощи иммуноцитохимического анализа и иммуноблоттинга с использованием антител к фактору плюрипотентности Oct4, а также окраски на щелочную фосфатазу. С помощью метода ЯМР-спектроскопии мы установили, что концентрация NAD+ в плюрипотентных клетках Е14, культивируемых в присутствии фактора ЛИФ, составляет около 4 нмоль/мг и остается неизменной после индукции дифференцировки ретиноевой кислотой. Также мы показали, что фармакологическая стимуляция биосинтеза NAD+ никотинамидрибозидом повышает уровень внутриклеточного NAD+ на 20%, и это не влияет на поддержание плюрипотентности клеток Е14. Более того, в условиях критического истощения внутриклеточного пула NAD+ при подавлении его синтеза из никотинамида ингибитором Nampt (FK866) клетки Е14 сохраняли плюрипотентность, в то время как уровень белка Oct4 был понижен.

KW - NAD+

KW - ЯМР-СПЕКТРОСКОПИЯ

KW - МЫШИНЫЕ ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ Е14 TG2α

KW - ПЛЮРИПОТЕНОСТЬ

KW - ДИФФЕРЕНЦИРОВКА

KW - Oct4

KW - NAD+

KW - Nmr spectroscopy

KW - MOUSE EMBRYONIC STEM CELLS TG2α E14

KW - pluripotency

KW - differentiation

KW - Oct4

UR - https://www.elibrary.ru/item.asp?id=52258632

M3 - статья

VL - 65

SP - 273

EP - 282

JO - Цитология

JF - Цитология

SN - 0041-3771

IS - 3

ER -