В ответ на неблагоприятные внешние воздействия в клетке запускается ряд неспецифических ответных реакций, называемых стрессом. К ним относят закисление цитоплазмы, а также образование биомолекулярных конденсатов – обратимых макромолекулярных комплексов, содержащих белки и нуклеиновые кислоты и формирующихся в цито- или нуклеоплазме за счет разделения фаз.
Cчитается, что в образовании биомолекулярных конденсатов задействованы белки, имеющие неупорядоченные участки. К числу таких белков относится Sup35, фактор терминации трансляции eRF3 у дрожжей, содержащий неструктурированный участок Sup35NM. Ряд исследователей полагают, что триггером образования биоконденсатов, в том числе конденсатов Sup35 при стрессе является именно закисление цитоплазмы [1,2], тем не менее, эта гипотеза нуждается в дополнительной проверке.
Целью данного исследования является изучение влияния pHцит на образование биоконденсатов NM-доменами Sup35. Для ее достижения Sup35NM был слит с красным флуоресцентным белком yTag-RFP-T и сверхпродуцирован в клетках S. cerevisiae. Клетки подвергали стрессовым воздействиям, приводящим к изменению pHцит (закисление внешней среды до рН 5,0 или гиперосмотический шок), затем визуализировали конденсаты Sup35NM с помощью флуоресцентной микроскопии. Параллельно измеряли pHцит in vivo с помощью pH-чувствительного белка sfpHluorin. В ходе экспериментов не обнаружили корреляции между изменением pHцит и конденсацией Sup35NM. Таким образом, образование конденсатов Sup35NM при помещении клеток в буферы с рН 5,0, pH 7,0 и при гиперосмотическом шоке не зависит от значения pHцит.
Исследование было выполнено при финансовой поддержке Санкт-Петербургского государственного -университета (проект № 95444727).
1. Franzmann, T. M. et al., (2018). Phase separation of a yeast prion protein promotes cellular fitness. Science (New York, N.Y.), 359(6371), eaao5654. https://doi.org/10.1126/science.aao5654
2. Munder, M. C. et al., (2016). A pH-driven transition of the cytoplasm from a fluid- to a solid-like state promotes entry into dormancy. eLife, 5, e09347. https://doi.org/10.7554/eLife.09347
