TY - CONF

T1 - Уабаин предотвращает ЛПС-индуцированное повреждение линии клеток IPEC-J2.

AU - Федорова, Арина Александровна

AU - Droessler, Linda

N1 - Conference code: 25

PY - 2022

Y1 - 2022

N2 - Дисфункции многих органов обусловлены нарушением тканевых барьеров. Перспективной задачей является определение фармакологических агентов, предотвращающих данные нарушения. В последние годы было установлено, что кардиотонические стероиды являются эндогенными регуляторами свойств различных органов, в том числе различных видов эпителиев. Сердечный гликозид уабаин, который является специфическим лигандом Na,K-АТФазы, влияет на молекулярную организацию плотных контактов в эпителиальных клетках кишечника. Низкие концентрации уабаина, сопоставимые с уровнем его эндогенного аналога, оказывают модулирующее действие на плотные контакты, которое сопровождается повышением трансэпителиального сопротивления (ТЭС) и снижением проницаемости плотных контактов в ткани тощей кишки. Предполагается, что превентивное действие уабаина в наномолярных концентрациях в условиях in vitro может влиять не только на экспрессию клаудинов и на барьерные характеристики в линии клеток тощей кишки IPEC-J2, но и оказывать протективное действие в условиях физиологических нарушений. Для исследования данной гипотезы была отработана модель липополисахарид (ЛПС)-индуцированного нарушения целостности эпителиального барьера в клетках линии IPEC-J2 при превентивном действии уабаина. После 21 дня культивирования в среде, содержащей или не содержащей уабаин (10 нМ), клетки были обработаны ЛПС (10 мкг/мл) в течение 24 час с апикальной стороны, чтобы имитировать бактериальный контакт с кишечным эпителием в просвете кишки. Каждые 2 дня проводили измерение ТЭС; через 24 час после инкубации с ЛПС клетки замораживали для последующего Вестерн-блота с использованием антител против клаудина-1, -3, -5. Уабаин в концентрации 10 нМ увеличивал ТЭС, начиная с 14-го дня культивирования, по сравнению с контролем. ЛПС нарушал барьерные свойства монослоя клеток, что проявлялось в снижении ТЭС в течение 24 час, а также сопровождалось снижением экспрессии клаудинов-1 и -3. Превентивное действие уабаина продемонстрировало протективный эффект, который заключался в противодействии этим нарушениям за счет увеличения уровня «уплотняющих» клаудинов-1 и -3 без изменения уровня клаудина-5. Полученные результаты показывают, что уабаин в наномолярной концентрации может влиять на барьерные свойства линии клеток IPEC-J2 и предотвращать ЛПС-индуцированные нарушения, по-видимому, посредством модуляции экспрессии клаудинов, опосредованной Na,K-АТФазой.Работа поддержана грантом РНФ № 18-15-00043.

AB - Дисфункции многих органов обусловлены нарушением тканевых барьеров. Перспективной задачей является определение фармакологических агентов, предотвращающих данные нарушения. В последние годы было установлено, что кардиотонические стероиды являются эндогенными регуляторами свойств различных органов, в том числе различных видов эпителиев. Сердечный гликозид уабаин, который является специфическим лигандом Na,K-АТФазы, влияет на молекулярную организацию плотных контактов в эпителиальных клетках кишечника. Низкие концентрации уабаина, сопоставимые с уровнем его эндогенного аналога, оказывают модулирующее действие на плотные контакты, которое сопровождается повышением трансэпителиального сопротивления (ТЭС) и снижением проницаемости плотных контактов в ткани тощей кишки. Предполагается, что превентивное действие уабаина в наномолярных концентрациях в условиях in vitro может влиять не только на экспрессию клаудинов и на барьерные характеристики в линии клеток тощей кишки IPEC-J2, но и оказывать протективное действие в условиях физиологических нарушений. Для исследования данной гипотезы была отработана модель липополисахарид (ЛПС)-индуцированного нарушения целостности эпителиального барьера в клетках линии IPEC-J2 при превентивном действии уабаина. После 21 дня культивирования в среде, содержащей или не содержащей уабаин (10 нМ), клетки были обработаны ЛПС (10 мкг/мл) в течение 24 час с апикальной стороны, чтобы имитировать бактериальный контакт с кишечным эпителием в просвете кишки. Каждые 2 дня проводили измерение ТЭС; через 24 час после инкубации с ЛПС клетки замораживали для последующего Вестерн-блота с использованием антител против клаудина-1, -3, -5. Уабаин в концентрации 10 нМ увеличивал ТЭС, начиная с 14-го дня культивирования, по сравнению с контролем. ЛПС нарушал барьерные свойства монослоя клеток, что проявлялось в снижении ТЭС в течение 24 час, а также сопровождалось снижением экспрессии клаудинов-1 и -3. Превентивное действие уабаина продемонстрировало протективный эффект, который заключался в противодействии этим нарушениям за счет увеличения уровня «уплотняющих» клаудинов-1 и -3 без изменения уровня клаудина-5. Полученные результаты показывают, что уабаин в наномолярной концентрации может влиять на барьерные свойства линии клеток IPEC-J2 и предотвращать ЛПС-индуцированные нарушения, по-видимому, посредством модуляции экспрессии клаудинов, опосредованной Na,K-АТФазой.Работа поддержана грантом РНФ № 18-15-00043.

M3 - тезисы

SP - 535

EP - 536

T2 - XXV Международная медико-биологическая конференция молодых исследователей "Фундаментальная наука и клиническая медицина - человека и его здоровье".

Y2 - 16 April 2022 through 16 April 2022

ER -