TY - CHAP

T1 - РАЗРАБОТКА ПОДХОДОВ ДЛЯ ФЕНОТИПИЧЕСКОЙ ДЕТЕКЦИИ АМИЛОИДОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ В ДРОЖЖАХ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

AU - Лашкул, Вероника Владимировна

AU - Качкин, Даниил Валерьевич

AU - Нужина, Юлия Викторовна

AU - Чернов, Юрий Олегович

AU - Рубель, Александр Анатольевич

PY - 2018/4/23

Y1 - 2018/4/23

N2 - Амилоиды – белковые агрегаты фибриллярной природы, формирующие межмолекулярные кросс-β-структуры. Повышенный интерес к изучению амилоидов связан с тем, что неправильная укладка и агрегация белков являются ключевыми событиями в патогенезе ряда неизлечимых нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона, диабет второго типа. Все эти болезни называются амилоидозами. В особую группу амилоидозов выделяют инфекционные амилоидозы или прионные заболевания, все они связаны с агрегацией и передачей между организмами белка PrP. Удобным модельным объектом для изучения амилоидов млекопитающих и анализа их взаимодействия друг с другом invivo являются дрожжи S. cerevisiae, поскольку амилоидогенные белки формируют в дрожжах агрегаты, сходные посвоим характеристикам с агрегатами, выявляемыми у млекопитающих, и в большинстве случаев не оказывающие токсического действия на дрожжевые клетки. Так как амилоидогенные белки не имеют в дрожжах собственного фенотипического проявления, для визуализации агрегации используют различные репортерные последовательности, например, YFP и CFP, позволяющие визуализировать агрегацию белков методами флуоресцентной микроскопии. Однако использование флуоресцентных белков не позволяет проводить масштабный скрининг факторов, влияющих на агрегацию белков. В нашей лаборатории разрабатывается дрожжевая модель, позволяющая по фенотипу «рост/отсутствие роста на селективных средах» оценивать амилоидогенный статус белков и проводить масштабный поиск факторов, влияющих на процессы амилоидогенеза. В качестве репортера мы используем C-терминальную последовательность дрожжевого фактора терминации трансляции - Sup35. В штаммах, маркированных нонсенс- мутациейade1-14 и несущих делецию хромосомной копии SUP35, гибридный белок, включающий последовательность изучаемого амилоидогенного белка и репортерную последовательность, должен эффективно выполнять функции терминатора трансляции, что можно детектировать по отсутствию роста дрожжей на селективной среде без аденина. Агрегация амилоидогенного белка будет приводить к росту штаммов на селективной среде. В настоящее время нами разрабатываются дрожжевые модели для фенотипического анализа агрегации мышиного белка PrP и пептида Abeta42 человека.Работа выполнена при поддержке грантов РНФ No 14-50-00069 и РФФИ No 18-04-00799. Для выполнения исследований использовалась приборная база РЦ «ЦКП ХРОМАС» и «РМиКТ» научного парка СПбГУ.

AB - Амилоиды – белковые агрегаты фибриллярной природы, формирующие межмолекулярные кросс-β-структуры. Повышенный интерес к изучению амилоидов связан с тем, что неправильная укладка и агрегация белков являются ключевыми событиями в патогенезе ряда неизлечимых нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона, диабет второго типа. Все эти болезни называются амилоидозами. В особую группу амилоидозов выделяют инфекционные амилоидозы или прионные заболевания, все они связаны с агрегацией и передачей между организмами белка PrP. Удобным модельным объектом для изучения амилоидов млекопитающих и анализа их взаимодействия друг с другом invivo являются дрожжи S. cerevisiae, поскольку амилоидогенные белки формируют в дрожжах агрегаты, сходные посвоим характеристикам с агрегатами, выявляемыми у млекопитающих, и в большинстве случаев не оказывающие токсического действия на дрожжевые клетки. Так как амилоидогенные белки не имеют в дрожжах собственного фенотипического проявления, для визуализации агрегации используют различные репортерные последовательности, например, YFP и CFP, позволяющие визуализировать агрегацию белков методами флуоресцентной микроскопии. Однако использование флуоресцентных белков не позволяет проводить масштабный скрининг факторов, влияющих на агрегацию белков. В нашей лаборатории разрабатывается дрожжевая модель, позволяющая по фенотипу «рост/отсутствие роста на селективных средах» оценивать амилоидогенный статус белков и проводить масштабный поиск факторов, влияющих на процессы амилоидогенеза. В качестве репортера мы используем C-терминальную последовательность дрожжевого фактора терминации трансляции - Sup35. В штаммах, маркированных нонсенс- мутациейade1-14 и несущих делецию хромосомной копии SUP35, гибридный белок, включающий последовательность изучаемого амилоидогенного белка и репортерную последовательность, должен эффективно выполнять функции терминатора трансляции, что можно детектировать по отсутствию роста дрожжей на селективной среде без аденина. Агрегация амилоидогенного белка будет приводить к росту штаммов на селективной среде. В настоящее время нами разрабатываются дрожжевые модели для фенотипического анализа агрегации мышиного белка PrP и пептида Abeta42 человека.Работа выполнена при поддержке грантов РНФ No 14-50-00069 и РФФИ No 18-04-00799. Для выполнения исследований использовалась приборная база РЦ «ЦКП ХРОМАС» и «РМиКТ» научного парка СПбГУ.

UR - http://download.biology21.ru/sbornik_2018.pdf

M3 - иная часть книжной публикации

SN - 9785918740453

SP - 133

EP - 134

BT - БИОЛОГИЯ – НАУКА ХХI ВЕКА

CY - Пущино

T2 - БИОЛОГИЯ – НАУКА XXI ВЕКА: 22-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых

Y2 - 23 April 2018 through 27 April 2018

ER -