TY - CONF

T1 - УАБАИН ПРЕДОТВРАЩАЕТ НАРУШЕНИЕ БАРЬЕРНОЙ ФУНКЦИИ ЭПИТЕЛИЯ КИШКИ КРЫСЫ, ВЫЗВАННОЕ ЛИПОПОЛИСАХАРИДОМ

AU - Федорова, Арина Александровна

PY - 2023

Y1 - 2023

N2 - Введение. Нарушение тканевых барьеров является одной из причин дисфункции различных органов. Ключевую роль в обеспечении барьерных свойств органов играют трансмембранные белки плотных контактов из семейства клаудина, а также окллюдин и трицеллюлин, обеспечивающие селективную проницаемость для ионов и макромолекул. Актуальной задачей является поиск эндогенных соединений, предотвращающих нарушение барьерной функции эпителия. Решающий вклад в формирование эпителиального фенотипа клеток вносит Na,K-АТФаза. В качестве инструмента для изучения вклада этого молекулярного комплекса в функции эпителиальных барьеров используют эндогенные аналоги кардиотонических стероидов. В частности, было показано, что специфический лиганд Na,K-АТФазы уабаин влияет на молекулярную организацию плотных контактов в эпителиальных клетках кишечника крысы. Для полноценного изучения регулирующих влияний различных факторов часто используют модели нарушения функций органов. Использование липополисахарида (ЛПС) клеточной стенки грамотрицательных бактерий, присутствующих в просвете кишки, является широко используемой моделью нарушения барьерных свойств эпителия путем изменения молекулярного состава плотных контактов. Предполагается, что в модели ЛПС-индуцированного нарушения барьерной функции эпителия кишки уабаин будет играть протекторную роль.Цель. Исследование роли уабаина в качестве протектора при ЛПС-индуцированном нарушении барьерных свойств эпителия тощей и толстой кишки крысы.Материалы и методы. Работа выполнена на самцах крыс Вистар 180-200 г. Крысам в течение 4-х дней ежедневно вводили уабаин (в/б, в дозе 1 мкг/кг), что двухкратно увеличивало его концентрацию в крови. Контрольным животным вводили 0.9% NaCl. На 4-ый день через 2 часа после введения уабаина или физиологического раствора крысам вводили ЛПС (в дозе 1 мг/кг) для моделирования условий ЛПС-индуцированного нарушения барьерной функции кишки. Через 24 час после введения ЛПС крыс декапитировали, извлекали ткань тощей и толстой кишки. В камере Уссинга было оценено трансэпителиальное сопротивление (ТЭС) и проницаемость для флуоресцеина натрия. Часть ткани тощей и толстой кишки была заморожена для исследования уровня белков плотных контактов (клаудин-1, -2, -3, -5, -8, окклюдин и трицеллюлин) методом Вестерн-блот.Результаты. ЛПС вызывал нарушения характерные для синдрома «повышенной проницаемости эпителия» в тонкой кишке крысы. Это выражалось в уменьшении ТЭС и в увеличении парацеллюлярной проницаемости для флуоресцеина натрия. Эти функциональные нарушения барьерных свойств эпителия сопровождались уменьшением уровня клаудинов, которые вносят вклад в непроницаемость эпителия для ионов, и трицеллюлина, который ограничивает диффузию органических молекул через эпителий. В толстой кишке ЛПС вызывал увеличение содержания клаудина-2, формирующего пору для перемещения воды.Предварительное введение уабаина крысам полностью предотвращало снижение ТЭС в тощей кишке. Одновременно с этим не наблюдалось увеличение парацеллюлярной проницаемости для флуоресцеина натрия. Уабаин предотвращал изменение уровня белков плотных контактов, вызванное введением ЛПС. В частности, уабаин препятствовал уменьшению уровня клаудина-1 и -8, обеспечивающих непроницаемость эпителия для ионов, и снижению уровня трицеллюлина, который обеспечивает межклеточный транспорт для макромолекул. В толстой кишке применение уабаина перед ЛПС предотвращало увеличение уровня «порообразующего» клаудина-2.Выводы. Таким образом полученные данные свидетельствуют, что уабаин в наномолярных концентрациях предотвращает ЛПС-индуцированное нарушение барьерной функции эпителия путем изменения уровня белков плотных контактов тощей и толстой кишки крысы. Работа поддержана грантом РНФ 18-15-00043.

AB - Введение. Нарушение тканевых барьеров является одной из причин дисфункции различных органов. Ключевую роль в обеспечении барьерных свойств органов играют трансмембранные белки плотных контактов из семейства клаудина, а также окллюдин и трицеллюлин, обеспечивающие селективную проницаемость для ионов и макромолекул. Актуальной задачей является поиск эндогенных соединений, предотвращающих нарушение барьерной функции эпителия. Решающий вклад в формирование эпителиального фенотипа клеток вносит Na,K-АТФаза. В качестве инструмента для изучения вклада этого молекулярного комплекса в функции эпителиальных барьеров используют эндогенные аналоги кардиотонических стероидов. В частности, было показано, что специфический лиганд Na,K-АТФазы уабаин влияет на молекулярную организацию плотных контактов в эпителиальных клетках кишечника крысы. Для полноценного изучения регулирующих влияний различных факторов часто используют модели нарушения функций органов. Использование липополисахарида (ЛПС) клеточной стенки грамотрицательных бактерий, присутствующих в просвете кишки, является широко используемой моделью нарушения барьерных свойств эпителия путем изменения молекулярного состава плотных контактов. Предполагается, что в модели ЛПС-индуцированного нарушения барьерной функции эпителия кишки уабаин будет играть протекторную роль.Цель. Исследование роли уабаина в качестве протектора при ЛПС-индуцированном нарушении барьерных свойств эпителия тощей и толстой кишки крысы.Материалы и методы. Работа выполнена на самцах крыс Вистар 180-200 г. Крысам в течение 4-х дней ежедневно вводили уабаин (в/б, в дозе 1 мкг/кг), что двухкратно увеличивало его концентрацию в крови. Контрольным животным вводили 0.9% NaCl. На 4-ый день через 2 часа после введения уабаина или физиологического раствора крысам вводили ЛПС (в дозе 1 мг/кг) для моделирования условий ЛПС-индуцированного нарушения барьерной функции кишки. Через 24 час после введения ЛПС крыс декапитировали, извлекали ткань тощей и толстой кишки. В камере Уссинга было оценено трансэпителиальное сопротивление (ТЭС) и проницаемость для флуоресцеина натрия. Часть ткани тощей и толстой кишки была заморожена для исследования уровня белков плотных контактов (клаудин-1, -2, -3, -5, -8, окклюдин и трицеллюлин) методом Вестерн-блот.Результаты. ЛПС вызывал нарушения характерные для синдрома «повышенной проницаемости эпителия» в тонкой кишке крысы. Это выражалось в уменьшении ТЭС и в увеличении парацеллюлярной проницаемости для флуоресцеина натрия. Эти функциональные нарушения барьерных свойств эпителия сопровождались уменьшением уровня клаудинов, которые вносят вклад в непроницаемость эпителия для ионов, и трицеллюлина, который ограничивает диффузию органических молекул через эпителий. В толстой кишке ЛПС вызывал увеличение содержания клаудина-2, формирующего пору для перемещения воды.Предварительное введение уабаина крысам полностью предотвращало снижение ТЭС в тощей кишке. Одновременно с этим не наблюдалось увеличение парацеллюлярной проницаемости для флуоресцеина натрия. Уабаин предотвращал изменение уровня белков плотных контактов, вызванное введением ЛПС. В частности, уабаин препятствовал уменьшению уровня клаудина-1 и -8, обеспечивающих непроницаемость эпителия для ионов, и снижению уровня трицеллюлина, который обеспечивает межклеточный транспорт для макромолекул. В толстой кишке применение уабаина перед ЛПС предотвращало увеличение уровня «порообразующего» клаудина-2.Выводы. Таким образом полученные данные свидетельствуют, что уабаин в наномолярных концентрациях предотвращает ЛПС-индуцированное нарушение барьерной функции эпителия путем изменения уровня белков плотных контактов тощей и толстой кишки крысы. Работа поддержана грантом РНФ 18-15-00043.

M3 - тезисы

SP - 183

T2 - АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ БИОМЕДИЦИНЫ–2023

Y2 - 30 March 2023 through 31 March 2023

ER -