TY - JOUR

T1 - ФАГОЦИТОЗ ИММУННЫМИ КЛЕТКАМИ ПОЛИМЕРНЫХ МИКРОЧАСТИЦ, МОДИФИЦИРОВАННЫХ БЕЛКАМИ

AU - Сахабеев, Родион

AU - Грудинина, Наталья

AU - Антимонова, О. И.

AU - Коржиков-Влах, Виктор Александрович

AU - Аликпарова, Элина Ренатовна

AU - Синицына, Екатерина Сергеевна

AU - Шавловский, Михаил Михайлович

N1 - ЦИТОЛОГИЯ, 2023, том 65, № 4, с. 1–8

PY - 2023/4/15

Y1 - 2023/4/15

N2 - В работе изучали способность трех модельных зеленых белков ковалентно связываться с микрочастицами (МЧ) на основе поли(D,L-молочной кислоты) (ПМК). Зеленый флуоресцентный белок (sfGFP), рекомбинантный белок слияния бета2-микроглобулина человека (β2M) с sfGFP (β2M-sfGFP), а также рекомбинантный белок слияния амилина человека (IAPP) с sfGFP (IAPP-sfGFP) выделяли методом аффинной хроматографии. Для формирования МЧ-ПМК использовали метод двойной эмульсии. Модификацию МЧ-ПМК белком подтверждали при помощи лазерной сканирующей микроскопии (ЛСМ). Кроме того, при помощи ЛСМ исследовали фагоцитоз МЧ-ПМК, модифицированных различными белками, и свободных модельных белков макрофагами. Было показано, что рекомбинантный sfGFP связывается с по-верхностью частиц в меньших количествах по сравнению с β2M-sfGFP и IAPP-sfGFP. По-видимому, это обусловлено тем, что аминогруппы белка, которые потенциально могли бы вступить в реакцию с активированными карбоксильными группами на поверхности частиц, оказываются стерически недоступными для этой реакции из-за структуры sfGFP. Белки β2M и IAPP в составе соответствующих рекомбинантных белков слияния являются спейсерными структурами между поверхностью сферических частиц и sfGFP.Установлено, что увеличение соотношения белок: частицы в три раза не приводило к повышению количества связанного белка на единицу массы частиц, что может свидетельствовать о том, что количество белка, которое может быть связано на единицу массы частиц, ограничивается емкостью самих частиц. Изучение фагоцитоза модифицированных белками МЧ-ПМК показало, что МЧ-ПМК, содержащие на поверхности модельные белки (β2M-sfGFP и IAPP-sfGFP), успешно фагоцитируются макрофагами и,таким образом, могут способствовать активации клеточного иммунного ответа, что важно при борьбе с различными инфекциями, в том числе вирусными. Кроме того, в работе был показан фагоцитоз модельных белков (β2M-sfGFP, IAPP-sfGFP). Это может быть связано с тем, что как β2M, так и IAPP являются амилоидогенными и склонными к агрегации белками. По всей видимости, агрегаты этих белков тоже способны поглощаться макрофагами благодаря увеличению размера по сравнению с их мономерными формами.

AB - В работе изучали способность трех модельных зеленых белков ковалентно связываться с микрочастицами (МЧ) на основе поли(D,L-молочной кислоты) (ПМК). Зеленый флуоресцентный белок (sfGFP), рекомбинантный белок слияния бета2-микроглобулина человека (β2M) с sfGFP (β2M-sfGFP), а также рекомбинантный белок слияния амилина человека (IAPP) с sfGFP (IAPP-sfGFP) выделяли методом аффинной хроматографии. Для формирования МЧ-ПМК использовали метод двойной эмульсии. Модификацию МЧ-ПМК белком подтверждали при помощи лазерной сканирующей микроскопии (ЛСМ). Кроме того, при помощи ЛСМ исследовали фагоцитоз МЧ-ПМК, модифицированных различными белками, и свободных модельных белков макрофагами. Было показано, что рекомбинантный sfGFP связывается с по-верхностью частиц в меньших количествах по сравнению с β2M-sfGFP и IAPP-sfGFP. По-видимому, это обусловлено тем, что аминогруппы белка, которые потенциально могли бы вступить в реакцию с активированными карбоксильными группами на поверхности частиц, оказываются стерически недоступными для этой реакции из-за структуры sfGFP. Белки β2M и IAPP в составе соответствующих рекомбинантных белков слияния являются спейсерными структурами между поверхностью сферических частиц и sfGFP.Установлено, что увеличение соотношения белок: частицы в три раза не приводило к повышению количества связанного белка на единицу массы частиц, что может свидетельствовать о том, что количество белка, которое может быть связано на единицу массы частиц, ограничивается емкостью самих частиц. Изучение фагоцитоза модифицированных белками МЧ-ПМК показало, что МЧ-ПМК, содержащие на поверхности модельные белки (β2M-sfGFP и IAPP-sfGFP), успешно фагоцитируются макрофагами и,таким образом, могут способствовать активации клеточного иммунного ответа, что важно при борьбе с различными инфекциями, в том числе вирусными. Кроме того, в работе был показан фагоцитоз модельных белков (β2M-sfGFP, IAPP-sfGFP). Это может быть связано с тем, что как β2M, так и IAPP являются амилоидогенными и склонными к агрегации белками. По всей видимости, агрегаты этих белков тоже способны поглощаться макрофагами благодаря увеличению размера по сравнению с их мономерными формами.

KW - микрочастицы

KW - поли(молочная кислота)

KW - иммобилизация белка

KW - зелёный флуоресцентный белок

KW - фагоцитоз

UR - https://www.elibrary.ru/zlipyj

U2 - 10.31857/S0041377123040119

DO - 10.31857/S0041377123040119

M3 - статья

VL - 65

SP - 376

EP - 383

JO - Цитология

JF - Цитология

SN - 0041-3771

IS - 4

ER -