Развитие многоклеточных животных зависит от координированной работы множества транскрипционных факторов, среди которых особая роль принадлежит гомеодоменным белкам из класса ANTP. Гены этих факторов образуют кластеры – группы сцепления, возникшие путём cis-дупликаций предкового гена. Известны три кластера – Hox-кластер, ParaHox-кластер и NK-кластер, последний из которых эволюционно наиболее древний. Все гены из класса ANTP многозадачны и обычно контролируют множество событий в развитии: от установления общего плана организации до терминальных тканеспецифичных дифференцировок. У большинства билатеральных животных эти гены работают колинеарно. Это означает, что от позиции в кластере зависит место, время и/или интенсивность их экспрессии. Эволюционное становление такой сложной регуляции остаётся загадкой, и для её разрешения необходимо подробное изучение универсальных и частных функций генов ANTP в разных модельных системах. Platynereis dumerilii - удобный модельный объект для изучения эволюционных вопросов, более того, для него уже существует база данных с интересующими нас генами из класса ANTP. Ранее мы обнаружили, что у аннелиды P. dumerilii почти все гены Hox-кластера имеют материнские транскрипты, причём некоторые из них сплайсируется каноническим образом (Maslakov et al., 2021). Мы решили проверить, справедливо ли это правило для других генов из класса ANTP. С помощью геноспецифичных праймеров мы убедились в наличии материнских транскриптов у 16 генов из кластеров Para-Hox и NK. Для дальнейшего анализа ситуации нам необходимо было клонировать фрагменты исследуемых генов. Мы использовали суммарную РНК из хвостов червя и «рандомные» гексамерные праймеры, чтобы получить комплементарные цепи ДНК методом обратной транскрипции. Используя геноспецифичные праймеры, мы синтезировали искомые фрагменты, затем лигировали их в транскрипционный вектор pAL2-T (Evrogen) и клонировали в штамме E. coli (JM109). Таким образом, нам удалось получить фрагменты 12 генов ANTP, из которых 9 имеют материнские транскрипты. Вектор со вставкой был использован для синтеза меченых РНК-зондов для последующей гибридизации in situ на ооцитах и ранних эмбрионах P. dumerilii. Предварительные данные о локализации материнских транскриптов могут служить отправной точкой для дальнейших исследований, направленных на выявление роли этих генов в процессах эволюции и развития в линии спиральных животных. Исследование выполнено за счёт средств Российского научного фонда (проект № 23-24-00426). Авторы выражают благодарность РЦ Культивирования Микроорганизмов (КМ) и ЦКП “Хромас” за помощь в получении данных.
Original languageRussian
Pages101
Number of pages1
StatePublished - 30 Oct 2024
EventВсероссийская научная конференция с международным участием, посвященная юбилею академика Б.Л. Астаурова «Генетика и индивидуальное развитие» - Москва, Russian Federation
Duration: 29 Oct 202431 Oct 2024

Conference

ConferenceВсероссийская научная конференция с международным участием, посвященная юбилею академика Б.Л. Астаурова «Генетика и индивидуальное развитие»
Country/TerritoryRussian Federation
CityМосква
Period29/10/2431/10/24

    Scopus subject areas

  • Biochemistry, Genetics and Molecular Biology(all)

ID: 130919991