Изучение морфологии супермеров плазмы крови с помощью сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения
Супермеры — это функциональные внеклеточные наночастицы, которые морфологически и молекулярно отличаются от экзосом. Известно, что эти структуры принимают участие в межклеточной коммуникации и содержат потенциальные биомаркеры различных заболеваний. [1]. К настоящему времени морфологические характеристики супермеров изучены недостаточно. Цель нашего исследования - описать морфологию супермеров и провести их измерение с помощью сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения.
Бедная тромбоцитами плазма крови была получена от 4 здоровых доноров. Плазму центрифугировали четыре часа 170 тыс g. Супернатант повторно центрифугировался 20 часов 170 тыс g. Затем супернатант после второго центрифугирования снова центрифугировали 20 часов 370 тыс g. Осадок промывали путем центрифугирования с фосфатно-солевым буфером. Полученные частицы фиксировались на стеклах и обезвоживались по ранее описанной методике [2]. Изучение морфологии проводили с помощью сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения на приборе Zeiss Auriga. Измерение размеров внеклеточных наночастиц выполнялось с помощью программы ImageJ. На препаратах выявлены сферические и эллипсоидные частицы диаметром от 10 до 70 нм, а также агрегаты таких частиц. Частицы на полученных фотографиях по своим морфологическим характеристикам соответствуют тем частицам, которые наблюдаются в работах по их визуализации посредством атомно-силовой и трансмиссионной электронной микроскопии.[2]
Полученные данные свидетельствуют о возможности морфологически описать экзомеры с помощью метода сканирующей электронной микроскопии, что дает большие возможности в изучении этих наноструктур в дальнейшем.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ 25-25-00057. с использованием оборудования МРЦ «Нанотехнологии» СПбГУ шифр проекта АААА-А19-119091190094-6.
1.Zhang Q, Jeppesen DK, Higginbotham JN et al. Supermeres are functional extracellular nanoparticles replete with disease biomarkers and therapeutic targets. Nat Cell Biol. Dec 2021. №23(12). P.1240-1254. doi: 10.1038/s41556-021-00805-8.
2.Kondratov, K.A., Petrova, T.A., Mikhailovskii, V.Y. et al. A study of extracellular vesicles isolated from blood plasma conducted by low-voltage scanning electron microscopy. Cell Tiss. Biol. 11, 181–190 (2017). https://doi.org/10.1134/S1990519X17030051