МЕХАНИЗМЫ ПРИОН-ЗАВИСИМОЙ ЛЕТАЛЬНОСТИ
МИССЕНС-МУТАНТОВ ПО ГЕНУ SUP35
ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Журавлева Г.А.


Кафедра генетики и биотехнологии,
Санкт-Петербургский государственный университет


Процесс терминации трансляции в клетках эукариот регулируется совместной работой факторов терминации трансляции eRF1 и eRF3 при участии ряда других белков. Гены SUP45 и SUP35, кодирующие белки eRF1 и eRF3 в клетках дрожжей-сахаромицетов являются жизненно-важными. В результате агрегации белка Sup35 (eRF3) происходит образование приона [PSI+], для чего необходимо присутствие N-терминального домена этого белка. Присутствие приона в клетках дрожжей обычно не влияет на жизнеспособность штаммов дикого типа, но может снижать выживаемость мутантных клеток, содержащих нонсенс-мутации в генах SUP45 и SUP35, как это было показано нами ранее. В данной работе мы охарактеризовали ранее отобранных в нашей лаборатории спонтанных мутантов, содержащих миссенс-мутации D363N, R372K, T378I (sup35-m) в консервативных участках С-терминального домена eRF3. Такие мутантные клетки теряли свою жизнеспособность при совмещении с прионом [PSI+]. Мутантные варианты белка Sup35 сохраняли способность включаться в предсуществующие агрегаты приона [PSI+], а также образовывать амилоидные агрегаты в системе in vitro; кроме того, изученные мутации sup35-m не влияли на индукцию [PSI+] и его стабильность. В то же время, мутации D363N, R372K, T378I нарушали ГТФазную активность белка Sup35 (eRF3). Таким образом, летальность мутаций sup35-m в сочетании с прионом [PSI+] объясняется недостаточной активностью ГТФазы у мутантных белков. Такая низкая активность мутантного Sup35 в сочетании с агрегацией Sup35 из-за присутствия приона [PSI+] недостаточна для сохранения жизнеспособности дрожжевых клеток.
Работа поддержана грантом РНФ 23-14-00063.