У эукариот терминация трансляции осуществляется факторами eRF1 и eRF3, у дрожжей Saccharomyces cerevisiae их кодируют жизненно важные гены SUP45 и SUP35 соответственно. Помимо снижения точности терминации трансляции, мутации в генах SUP45 и SUP35 имеют ряд плейотропных эффектов, в том числе снижение жизнеспособности клеток. В нашей лаборатории были получены коллекции жизнеспособных нонсенс-мутантов как по гену SUP45, так и SUP35. Ранее в нашей лаборатории было показано, что делеции генов UPF1 и UPF2 влияют на эффективность замещения плазмид с геном SUP45 на плазмиды c мутантными аллелями sup45-n на фоне хромосомной дизрупции этого гена, то есть улучшают жизнеспособность мутантов по гену SUP45. Кроме того было
показано, что мутации sup45 и sup35 приводят к стабилизации мРНК с преждевременными стоп-кодонами, также как и делеция UPF1. Это может свидетельствовать о том, что мутации
в генах, кодирующих факторы терминации трансляции, влияют не только на точность синтеза белка, но и на стабильность мРНК. Известно, что факторы терминации работают в
комплексе eRF1 : eRF3 : GTP : Mg2+, при этом eRF1 взаимодействует с Upf1, тогда как eRF3 может взаимодействовать с Upf1, UpF2 и Upf3, а также с Pab1 (poly(A)_binding protein). В нашей работе методом проточной цитофлуорометрии было показано, что жизнеспособность
клеток дрожжей с мутантными аллелями sup45-105 и sup35-218 в 3-4 раза ниже, чем у клеток с аллелями дикого типа. Мы показали, что на фоне делеции гена UPF1 жизнеспособность
мутантов sup45-105 и sup35-218 не отличается от клеток дикого типа. В данной работе мы проверили влияние точковых мутаций upf1, затрагивающих как цистеин- и цистидинсодержащую область, так и АТФазный-геликазный участок Upf1. Мы показали, что мутации, затрагивающие различные функциональные домены белка Upf1 оказывают разное влияние на жизнеспособность клеток с мутантными факторами терминации трансляции. Это может быть обусловлено нарушением взаимодействия белков NMD и факторов терминации.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 23-14-00063, с использованием оборудования
РЦ РМиК СПбГУ