TY - JOUR

T1 - Сравнение эффективности якорных белков ScAGα1p, KpCW51p, KpCW61p для поверхностного дисплея у дрожжей Komagataella phaffii

AU - Цыганков, Михаил Александрович

AU - Румянцев, Андрей Михайлович

AU - Макеева, Анастасия Станиславовна

AU - Падкина, Марина Владимировна

PY - 2022/12/24

Y1 - 2022/12/24

N2 - Актуальность. Дрожжевой дисплей – эффективная технология выведения на поверхность клетки целевых белков посредством их слияния с белками клеточной стенки. Данная методика, в том числе, позволяет получать на основе дрожжей вакцинные препараты путем экспонирования на их клеточной поверхности белков-антигенов. Поиск и характеристика белков, позволяющих эффективно экспонировать целевые белки на поверхности клеток Komagataella phaffii является актуальной задачей. Цель работы. Сравнить эффективность белков клеточной стенки ScAGα1p, включая исследование нескольких вариантов кодирующей последовательности гена ScAGα1, а также KpCW51p, KpCW61p для экспонирования репортерного белка на поверхности клеток. Методы. Изучаемые последовательности генов были проклонированы под контролем промотора гена АОХ1 в одной рамке считывания с геном репортерного белка eGFP и интегрированы в геном штамма Х-33 дрожжей K. phaffii. Результаты. Иммуноцитохимический анализ и конфокальная микроскопия штаммов, экспонирующих на своей поверхности белок eGFP в условиях индукции промотора гена АОХ1, позволили выявить наиболее эффективный якорный белок. Наилучшие результаты были продемонстрированы при использовании белка ScAGα1 – альфа-агглютинина дрожжей S.cerevisiae, структурный ген которого не содержал нативной 3`-некодирующей области. Выводы. Полученные в работе плазмиды позволят получить штаммы дрожжей K. phaffii, эффективно экспонирующий на своей поверхности белки, в том числе антигены, которые можно будет использовать в качестве вакцинного препарата.

AB - Актуальность. Дрожжевой дисплей – эффективная технология выведения на поверхность клетки целевых белков посредством их слияния с белками клеточной стенки. Данная методика, в том числе, позволяет получать на основе дрожжей вакцинные препараты путем экспонирования на их клеточной поверхности белков-антигенов. Поиск и характеристика белков, позволяющих эффективно экспонировать целевые белки на поверхности клеток Komagataella phaffii является актуальной задачей. Цель работы. Сравнить эффективность белков клеточной стенки ScAGα1p, включая исследование нескольких вариантов кодирующей последовательности гена ScAGα1, а также KpCW51p, KpCW61p для экспонирования репортерного белка на поверхности клеток. Методы. Изучаемые последовательности генов были проклонированы под контролем промотора гена АОХ1 в одной рамке считывания с геном репортерного белка eGFP и интегрированы в геном штамма Х-33 дрожжей K. phaffii. Результаты. Иммуноцитохимический анализ и конфокальная микроскопия штаммов, экспонирующих на своей поверхности белок eGFP в условиях индукции промотора гена АОХ1, позволили выявить наиболее эффективный якорный белок. Наилучшие результаты были продемонстрированы при использовании белка ScAGα1 – альфа-агглютинина дрожжей S.cerevisiae, структурный ген которого не содержал нативной 3`-некодирующей области. Выводы. Полученные в работе плазмиды позволят получить штаммы дрожжей K. phaffii, эффективно экспонирующий на своей поверхности белки, в том числе антигены, которые можно будет использовать в качестве вакцинного препарата.

KW - дрожжевой дисплей, Pichia pastoris, Komagataella phaffii, гетерологичный синтез белков, вакцинные препараты

U2 - 10.17816/ecogen112509

DO - 10.17816/ecogen112509

M3 - статья

VL - 20

SP - 359

EP - 371

JO - ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ГЕНЕТИКА

JF - ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ГЕНЕТИКА

SN - 1811-0932

IS - 4

ER -