Разработка дрожжевой модели для фенотипического анализа конформационного перехода прионного белка PrP

Research outputpeer-review

Abstract

Болезни неправильной укладки являются весьма распространенными заболеваниями, характеризующимися неправильной укладкой определенных белков организма. К таким заболеваниям относятся болезнь Альцгеймера и прионные заболевания, так как они ассоциированы с агрегацией амилоидных белков Aβ и PrP, что является характерной чертой этих расстройств. На сегодняшний день все они являются неизлечимыми. Удобным модельным объектом для изучения амилоидов млекопитающих in vivo являются дрожжи Saccharomyces cerevisiae, так как формируемые в дрожжах агрегаты не токсичны и вместе с этим сходны с агрегатами,
выявляемыми у млекопитающих. На данный момент фенотипическая детекция агрегации белков в дрожжах невозможна. В нашей лаборатории разрабатывается дрожжевая модель, позволяющая по фенотипу оценивать амилоидогенный статус белков и проводить масштабный поиск факторов,
влияющих на процессы амилоидогенеза. В качестве репортера мы используем C-терминальную последовательность дрожжевого фактора терминации трансляции — Sup35. В штаммах, маркированных нонсенс-мутацией ade1-14 и несущих делецию хромосомной копии SUP35, гибридный белок, включающий последовательность изучаемого амилоидогенного белка и репортерную последовательность, должен эффективно выполнять функции терминатора трансляции, что можно детектировать по отсутствию роста дрожжей на селективной среде без аденина. Агрегация амилоидогенного белка будет приводить к росту штаммов на селективной среде. В настоящее время нами разрабатываются дрожжевые модели для фенотипического анализа агрегации мышиного белка PrP и пептида Aβ человека.
Работа выполнена при поддержке грантов РНФ №14-50-00069 и РФФИ №18-04-00799. Для выполнения исследований использовалась приборная база РЦ «ЦКП ХРОМАС» и «РМиКТ» научного парка СПбГУ.

Cite this