В течение отчетного периода мы секвенировали недостающие библиотеки для двух видов Terminoflustra membranaceotruncata и Dendrobeania fruticosa. Собраны и аннотированы референсные транкскриптомы обоих видов. Данные по экспрессии и аннотированию генов в референсном транскриптоме D. fruticosa были интегрированы в реляционную базу данных.
На основе анализа дифференциальной экспрессии генов, нами были получены данные о генах, специфичных для зооидов разных типов. Мы провели предварительное сравнение изолированных транскриптомов авикуляриев. Ожидаемой трудностью стало “неравенство” транскриптомов двух видов (T. membranaceotruncata и D. fruticosa) по числу транскриптов в первичной сборке транскриптомов. Методическая сложность заключается в невозможности полного исключения из ассемблированных транскриптомов всех потенциально контаминирующих последовательностей и высоко консервативных последовательностей Lophotrochozoa. Мы считаем, что сейчас важна дополнительная верификация полученных данных. Во-первых, требуется нормализация изолированных транскриптомов авикуляриев. Сейчас мы реализуем несколько ресурсоемких в отношении вычислительного времени процессов. Во-вторых, осуществляется повторная сборка транскриптомов с разной длиной k-меров и их очистка от рибосомальных последовательностей. После завершения этого этапа (пока что он закончен частично) будут предсказаны белковые последовательности на основе полученных транскрпитов с использованием стандартных инструментов для всех ассемблирвоанных транскриптомов и оценка контаминации. На основе полученных в итоге данных будет принято решение о включении в конечный анализ того или иного набора транскриптов.
Нами впервые детально исследовано строение авикуляриев D.fruticosa и T.membranaceotruncata с использованием комбинации разных методов (трансмиссионная и сканирующая электронная микроскопия, гистология, конфокальная микроскопия). Использованный нами подход позволил выявить неизвестные ранее особенности строения авикуляриев.
Не смотря на ярко выраженные внешние отличия в форме, размерах и пропорциях основных структурных элементов, некоторые черты в строении авикуляриев обоих видов оказались абсолютно идентичными. Стенка тела представлена однослойным эпидермисом, который выделяет на своей поверхности эктоцисту. Толщина и состав последней варьируют в зависимости от участка авикулярия. Ко внутри от эпидермиса мы не обнаружили ни базальной пластинки, ни клеток целотелия. Таким образом, объёмная полость тела авикулярия имеет уникальную природу: она не соответствует ни целомической полости (отсутствует целотелий), ни первичной полости тела (отсутствует внеклеточный матрикс). Нами впервые показано наличие специализированных сухожильных клеток у мшанок и описана их ультраструктура. Наши данные позволяют выделить два типа сухожильных клеток: типичные эпидермальные сухожильные клетки (обеспечивающие крепление проксимальных концов мышечных пучков) и «аподемальные» сухожильные клетки.
Остальные структурные компоненты авикуляриев исследованных видов имеют общий план строения, однако демонстрируют и специфические особенности организации. Так, например, вестигиальные полипиды обоих видов включают одинаковые компоненты, но клеточный состав рудиментарных лофофоров отличается. Нами впервые проведён сравнительный анализ организации нервной и мышечной систем у авикуляриев 4 видов мшанок (T.membranaceotruncata, D.fruticosa, Aquiloniella scabra и Caberea ellisii). Мышечная система авикуляриев исследованных видов имеет общий план строения. Аддукторы являются единственным постоянным элементом мышечной системы, в то время как все остальные компоненты демонстрируют разную степень вариабельности у исследованных видов. Нервная система авикуляриев всех исследованных видов демонстрирует удивительное однообразие, вариабельным оказалось лишь количество первично-чувствующих нейронов как в эпидермисе рудиментарного лофофора, так и в пределах фронтальной мембраны.